發(fā)布時(shí)間：2023-03-15 15:00:14
序言：寫(xiě)作是分享個(gè)人見(jiàn)解和探索未知領(lǐng)域的橋梁，我們?yōu)槟x了8篇的大學(xué)邀請(qǐng)函樣本，期待這些樣本能夠?yàn)槟峁┴S富的參考和啟發(fā)，請(qǐng)盡情閱讀。
Dear Courtyard Friend:
Hello everyone!
Weiwei my school, century vicissitudes, redbud competition Yan, spring is ang; Water clear wood, Huang Huang on Xiang, zi LAN Shu Hui, salary spread in all directions.
April 24, 1992 is an important moment in the history of Tsinghua Universitys centennial. It is a glorious century. Since its birth, Tsinghua has shouldered the great historical responsibility and mission of national rejuvenation and the rise of China. After a hundred years of searching for a journey, Tsinghuas years are believed to have precipitated into precious memories in life and become the unique character of Tsinghua people.
It takes three generations to make a gentleman. On the occasion of Tsinghua Universitys 100th birthday, we couldnt help thinking of the happy picture of the 10th anniversary of the Institute of Public Administration, like yesterday. In the new century in Tsinghua, the college will also uphold the Tsinghua motto of Striving for Self - improvement and Carrying Virtue and the motto of Mingde for Public Service to train more talents for the society. To provide more and better advice for national and local governments at all levels to make decisions and make contributions to the development and progress of Chinese society.
On the occasion of the celebration of the spring return to the earth and the revival of all things, the School of Public Administration sends warm greetings and good wishes to all members of the school, and sincerely invites everyone to return to the beautiful tsinghua campus, join the whole school with teachers and students, participate in the grand ceremony, witness the history, share the splendor and friendship, see Tsinghuas new appearance in one hundred and talk about the future development of the alma mater.
On April 23, the School of Public Administration will hold a tea party with college friends during the celebration, and the school will also hold the first back-to-school memorial meeting for graduate students and alumni, at which time all college friends are welcome to attend.
Finally, once again warmly welcome all the members of the school to the homecoming party to witness this historic moment.
I wish you success in your work and happiness in your family.
大學(xué)邀請(qǐng)函范文模板 英語(yǔ)
Dear Alumni:
Hello!
Weiwei my school, century vicissitudes; Time flies by and the years are like songs. Henan Agricultural University has gone through a 100 - year unforgettable journey and will celebrate its 100th birthday in July 20xx. Since the establishment of agricultural higher education in 1912, Henan Agricultural University has always adhered to the school-running philosophy of caring for the health and enriching the people and abided by the school motto of striving for self-improvement and seeking truth from facts, closely linking its own development with the fate of the country and the nation, with the changes of the times and society, and cultivating more than 100,000 agricultural science and technology, education and management talents for the country and society, and making positive contributions to economic construction and social development.
As the stars move, the salary fire follows one another. It takes three generations to make a gentleman. Lin College is the same age as Henan Agricultural University, and it is one of the oldest colleges in the history of running a 100 - year agricultural university. The college now has 8 undergraduate majors in forestry, landscape architecture, environmental engineering, art design, urban planning, tourism management, geographic information system and environmental science ( forestry and landscape architecture are national specialties ), covering 5 disciplines of agriculture, engineering, science, art and management. There are 2 first-class doctoral programs in forestry and landscape gardening, 11 doctoral programs in two disciplines, 4 first-class graduate programs in forestry, ecology, architecture and landscape gardening, 5 provincial and ministerial key programs, and 2 provincial and ministerial key laboratories ( training ), with more than 2600 undergraduate and graduate students.
The development and growth of Lin College can not be separated from the care and support of all alumni. For a long time, the exchange and cooperation between Lin College and alumni in personnel training and scientific research have been deepening and strengthening. Alumni have consistently cared for and supported the construction and development of the College in various forms and through various channels, and have played an important role in improving the teaching and scientific research level of the College and the conditions for running the College. The history of the alma mater has been condensed with your painstaking efforts, and the brilliance of the alma mater has reflected your achievements. Here, we express our heartfelt thanks to you.
大學(xué)邀請(qǐng)函范文格式 英語(yǔ)
Dear Alumni:
Hello! Time flies, time flies. In the autumn of this century, Fujian Normal University celebrated its centennial. The alma mater has gone through a century of history, bearing the sound of the sincere feet of every alumnus. In spring and autumn, peach and plum are now fragrant. On the eve of the centennial of the alma mater, the faculty and students of the life science institute of Fujian normal university thank you for winning honor for your alma mater in your post, for the achievements you have created, for setting up a good public image for your alma mater, and for the construction and development of your alma mater all the time. To this end, we sincerely invite you to witness the centennial celebration of your alma mater in your busy schedule, and to gather together old and new alumni to celebrate a beautiful day. Alumni returned to the school for discussion and guidance. Some alumni were unable to receive invitations due to the change of work unit or address. Please tell each other.
大學(xué)畢業(yè)同學(xué)聚會(huì)邀請(qǐng)函模板
親愛(ài)的同學(xué)們 :
你們好 !
光陰荏苒，歲月如梭，逝者如斯夫。轉(zhuǎn)眼間，我們畢業(yè)已近二年。二年間世遷轉(zhuǎn)瞬間，二年間，人在旅途風(fēng)雨兼程，二年間，桃花匆匆花開(kāi)花謝，二年里桂花飄香香去香來(lái)……二年間，我們每個(gè)人所走的路不盡相同，或春風(fēng)得意，或平平淡淡，或艱辛坎坷……但是，無(wú)論人生如何浮沉，無(wú)論貧富貴賤如何，也無(wú)論世事如何變遷，我們都沒(méi)有忘記大學(xué)同學(xué)間的真摯友情。多少次夢(mèng)里相聚，多少次心馳神往。
二年后的今天，我們已不再身處求學(xué)歲月，不再青春懵懂。二年的風(fēng)霜雪雨，我們體味了人生求學(xué)生涯向職場(chǎng)過(guò)渡的酸、甜、苦、辣，在經(jīng)歷世事的浮浮沉沉之后，才發(fā)覺(jué)：最難以忘懷和割舍不掉的依舊是那份同學(xué)情，那份情誼如同一壇老酒，越久就越香越濃，悠遠(yuǎn)而回味無(wú)窮;過(guò)去發(fā)生的故事，沉淀二年，依然讓人感動(dòng)，需要我們用一生去回憶、去收藏。
人生沉浮二年載，同學(xué)情義始最真。
來(lái)吧!讓我們暫時(shí)拋開(kāi)繁忙的事務(wù)，掙脫身邊的煩惱，遠(yuǎn)離塵世的喧囂，相聚于昔日求學(xué)的都市武漢，共飲這壇收藏了二年的美酒，忘卻憂(yōu)慮讓心棲息;來(lái)吧!讓我們一起重溫青春的夢(mèng)想，回歸純真爛漫的大學(xué)生活，激發(fā)我們奮發(fā)向上的熱情和活力，找回我們漸行漸遠(yuǎn)的青春;來(lái)吧!二年桑田滄海，別因汝的缺席而使聚會(huì)失色!讓我們重溫過(guò)去美好的記憶!讓我們重溫過(guò)去美好的時(shí)光!展望精彩的明天!
我們真誠(chéng)邀請(qǐng)各位同學(xué)暫時(shí)拋開(kāi)塵世的喧囂，掙脫身邊的煩惱，盡享老同學(xué)相聚的溫馨——讓心棲息，忘卻憂(yōu)慮;說(shuō)說(shuō)真話(huà)，談?wù)動(dòng)亚?回首往昔，暢想未來(lái);交流感悟，相互鼓舞。老同學(xué)啊，我們已經(jīng)久違，都已疲憊;拋開(kāi)煩惱、讓心沉醉……等汝歸來(lái)，我們歡聚一堂!同學(xué)們盼望著與汝相聚!
相聚二年盛會(huì)，我們共期盼!
聚會(huì)的具體時(shí)間地點(diǎn)正在全力商議，現(xiàn)經(jīng)多數(shù)同學(xué)來(lái)訊來(lái)電建言，已初步有了部分較好的方案。大家有什么好的意見(jiàn)和建議可以在群里面提出來(lái)，希望大家踴躍參加，共同期待相聚時(shí)刻的到來(lái)!
此致
敬禮
大學(xué)畢業(yè)同學(xué)聚會(huì)邀請(qǐng)函模板
可愛(ài)的xx大學(xué)xx級(jí)土木工程四班以及各班同學(xué)們：
本來(lái)想順應(yīng)這個(gè)時(shí)代的習(xí)慣，在網(wǎng)上摘抄幾句煽情的話(huà)語(yǔ)，禍害一下你們的思緒，為蓄謀已久的聚會(huì)做個(gè)鋪墊。想想我找得著的你們肯定也早就看過(guò)了，寫(xiě)出來(lái)還要被笑話(huà)，于是不如說(shuō)幾句樸素真摯的話(huà)，真心希望能在你們的小心坎里掀起一點(diǎn)小小的波瀾。
時(shí)間真是一把快刀子，恍惚間想必十年的光景已經(jīng)把我們都刻畫(huà)成了另外的模樣，坐下來(lái)，對(duì)著鏡子，看看自己的樣子，是否還想得起十年前的摸樣!是否還想得起一起混過(guò)四年的他她它的模樣!是否拿起照片都不能把曾經(jīng)熟悉的名字一一念出來(lái)!是否在喝醉或者沒(méi)喝醉做夢(mèng)的時(shí)候到過(guò)一個(gè)似曾相識(shí)的地方，大門(mén)口飄著“燕山大學(xué)”的字樣!是否會(huì)被第二天考試,前一天還沒(méi)看書(shū)的念頭嚇醒過(guò)!是否看著現(xiàn)在的老公或老婆更懷念曾經(jīng)是同學(xué)的他或者她，亦或是到畢業(yè)前都未曾開(kāi)口，到如今已成為追憶的那個(gè)人那個(gè)地方……!
十年間，十年后，我們都還在為生活、為夢(mèng)想、為理想打拼、努力、奮斗的路上，但總會(huì)有那么一個(gè)時(shí)刻，突然間不知從哪里來(lái)的思緒，“上學(xué)的時(shí)候真好”，“真想再回去上一回學(xué)”，(不要掩飾自己，你肯定有過(guò)這種時(shí)刻，別裝啊，我去!)，組織聚會(huì)不是為了聚會(huì)，而是為了在你疲憊或者渴望的時(shí)候，搭設(shè)一個(gè)短暫卻至真的港口給我們?nèi)ネ？恳幌拢婢徠?。再暢談一下理想，再發(fā)泄一下情緒，再吹吹牛，再?lài)Z嘮嗑。
人是一種奇怪的動(dòng)物，真正力量的源泉只有來(lái)自?xún)?nèi)心的平靜、真摯的友誼和情感。所以，你想在未來(lái)的路上獲得再次加油的機(jī)會(huì)嗎，來(lái)同學(xué)會(huì)吧，親愛(ài)的同學(xué)們會(huì)用最純真的友情洗去你心靈的塵埃，注入你前進(jìn)的激情。
來(lái)吧，同學(xué)會(huì)，加油啊!
同意的舉手……
2015年我校共有畢業(yè)生5405名（碩士研究生559名，本科生4846名），工商學(xué)院有本科畢業(yè)生1472名。為更好地向貴單位推薦優(yōu)秀人才，促進(jìn)畢業(yè)生充分就業(yè)，我校定于2015年3月21日（周六）舉辦2015屆畢業(yè)生春季就業(yè)市場(chǎng)，特邀請(qǐng)貴單位參會(huì)，有關(guān)事項(xiàng)如下：
一、洽談時(shí)間及地點(diǎn)
時(shí)間：2015年3月21日（周六）9:00～16:30
地點(diǎn)：振華圖書(shū)館一樓和八餐廳一樓（秀山校區(qū)，馬向路）
二、報(bào)到時(shí)間及地點(diǎn)
時(shí)間：3月20日10:00～17:00
地點(diǎn)：安工大賓館（佳山校區(qū)，湖東路59號(hào)）（賓館電話(huà)：0555-2311410）
備注：已報(bào)名參會(huì)且3月21日上午7:30～8:30報(bào)到的用人單位，請(qǐng)直接至洽談場(chǎng)館的報(bào)到處報(bào)到。
三、攤位安排
展位預(yù)設(shè)400個(gè)，提供長(zhǎng)條桌、折椅和茶水。布展材料由學(xué)校統(tǒng)一制作，內(nèi)容包括單位名稱(chēng)、所在省市、招聘專(zhuān)業(yè)及人數(shù)等基本信息，單位也可自帶易拉寶（尺寸不超過(guò)80*200cm）。
四、其他事項(xiàng)
1、會(huì)議不收攤位費(fèi)和會(huì)務(wù)費(fèi)。
2、若需筆試、面試場(chǎng)地及安排住宿，請(qǐng)?jiān)诨貓?zhí)上注明。住宿可委托學(xué)校統(tǒng)一安排，費(fèi)用自理。需預(yù)訂返程票的，請(qǐng)自行在網(wǎng)上提前辦理。
3、因場(chǎng)地有限，請(qǐng)參會(huì)單位提前將“參會(huì)回執(zhí)”、營(yíng)業(yè)執(zhí)照副本和組織機(jī)構(gòu)代碼證，于3月13日前傳真或發(fā)郵件至我中心，以便我們做好宣傳和接待工作。
4、用人單位和畢業(yè)生經(jīng)雙向選擇，可現(xiàn)場(chǎng)簽訂就業(yè)協(xié)議書(shū)。
5、代表如在20日?qǐng)?bào)到：在馬鞍山市火車(chē)站或汽車(chē)站，可乘3、6、113路等公交或出租車(chē)至安工大賓館（佳山校區(qū)，湖東路59號(hào)）,學(xué)校不安排接送站。
6、我校招聘單位主管QQ群：140451499，歡迎加入。
聯(lián)系人：王青山、趙傳剛、丁忠利 手機(jī)：13515550691
電話(huà)：0555－23156992315696 傳真：0555-2315689
安徽工業(yè)大學(xué)大學(xué)生就業(yè)指導(dǎo)中心
在這個(gè)布滿(mǎn)了新的挑戰(zhàn)的xxxx年里，?？次覀冎匦戮蹠?huì)，再次凝聚，為的是即使孤獨(dú)的路也能有人支持，為的是跌倒時(shí)也有人扶持，為的是有人惦記你你才能繼續(xù)堅(jiān)持!
所以別忘了，在仲春中旬，在xx，我們將齊聚，不要少了你!
具體安排：
1.聚會(huì)時(shí)間：暫定xx月中旬(由于很多同學(xué)忙于找工作，具體日期和時(shí)間待同學(xué)聯(lián)系之后再議，原則是盡量保證都能出席)，時(shí)間是下午三點(diǎn)到晚上8點(diǎn)(暫定)
2.聚會(huì)地點(diǎn)：暫定
3.聚會(huì)安排：具體活動(dòng)內(nèi)容及項(xiàng)目將在確定職員之后商議具體事宜，同時(shí)將征求所有人意見(jiàn)，包括進(jìn)餐，娛樂(lè)項(xiàng)目及其他。
4.聚會(huì)用度：實(shí)行均攤制，估計(jì)50元(人均)左右(以實(shí)際情況暫定)。
5.具體聯(lián)系人：xxx xxxxxxxxxxx
ps：1.本次聚會(huì)會(huì)邀請(qǐng)班主任xxx;
2.初步設(shè)想不包括住宿，由于很多人都能找到住的地方，剩下的往同學(xué)家也能解決，假如大家有住宿要求，在聚會(huì)內(nèi)容征集意見(jiàn)時(shí)可以提出來(lái)，可以安排同意住宿;
3.?？创蠹艺湎н@次機(jī)會(huì)，?？创蠹胰珕T參加，以后怕是沒(méi)這么全了。
4.預(yù)祝大家新年快樂(lè)!
同時(shí)請(qǐng)積極尋找沒(méi)有地址或地址已經(jīng)變化的同學(xué)并通知他(她)。
摘 要：目的：探討中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清對(duì)人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。方法：將小鼠隨機(jī)分為正常組、生理鹽水組和大補(bǔ)陰湯組，連續(xù)灌胃給藥7天后，眼眶取血，分離血清；生物倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，MTT法檢測(cè)大補(bǔ)陰湯含藥血清對(duì)人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。結(jié)果：大補(bǔ)陰湯作用H460細(xì)胞48h和72h以后，可見(jiàn)部分細(xì)胞變圓，體積變小，有凋亡小體產(chǎn)生。大補(bǔ)陰湯可時(shí)間依賴(lài)性抑制H460細(xì)胞的生長(zhǎng)。結(jié)論：中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清可以抑制H460細(xì)胞的增殖，為進(jìn)一步探討其抗腫瘤作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
關(guān)鍵詞：大補(bǔ)陰湯；血清藥理；H460細(xì)胞
大補(bǔ)陰湯為補(bǔ)益類(lèi)中藥復(fù)方，該方出自《丹溪心法》，是滋陰降火的代表方劑。全方由熟地黃、龜板、知母、黃柏和豬脊髓組成。臨床常用于相應(yīng)的氣虛陰虛病證，體內(nèi)用藥多起到滿(mǎn)意的療效。近年來(lái)的臨床實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)。其對(duì)慢性再生障礙性貧血、頑固性失眠、出血性疾病及惡性腫瘤等疾病具有較好的治療作用。本實(shí)驗(yàn)引入血清藥理學(xué)方法(即體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)合的一種方法)，用服藥后的小鼠血清(含藥血清)代替中藥煎劑作用于體外細(xì)胞，研究中藥復(fù)方大補(bǔ)陰湯含藥血清對(duì)人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1．1 藥品與僅器二氧化碳培養(yǎng)箱(HH?CP－1，上海)，生物倒置顯微鏡(AE20，Mode)，96孔培養(yǎng)板(Nune，Roskil-如，Denmark)，胎牛血清(天津?yàn)?yáng)生物試劑公司)，RPMI一1640培養(yǎng)基(GIBCO)，甲基噻唑藍(lán)(MTT)，二甲基亞砜(DMSO)。熟地黃、龜板、知母、黃柏(購(gòu)自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥局)，豬脊髓(購(gòu)自家樂(lè)福超市)。
1．2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠30只(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，雌雄各半，體重18-22g。
2 方法
2．1 細(xì)胞培養(yǎng)人非小細(xì)胞性肺癌H460細(xì)胞株(Ameri-can Type Culture Collection)，細(xì)胞單層接種在含5％胎牛血清，2％谷氨酰胺，RPMI-1640培養(yǎng)液中，在溫度為37℃，C02濃度為5％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2．2 中藥復(fù)方液的制備大補(bǔ)陰湯(熟地黃15g，龜板15g，黃柏9g，知母各9g，豬脊髓)，上述中藥復(fù)方藥物成分，加水煎煮兩遍，合并兩次濾液，濃縮至每毫升含原中藥復(fù)方成分生藥1g。置4℃冰箱保存儲(chǔ)備。
2．3含藥血清的制備昆明種小鼠30只，雌雄各半，體重18～22g。共分為3組，每組10只，雌雄各半，即空白組、鹽水組和大補(bǔ)陰湯組。連續(xù)7天灌胃給藥，每日1次，每次每只0.4mL/10g。上述連續(xù)灌胃7天的小鼠，于眼眶取血，靜置后離心分離血清10min(2000r/min)，56℃水浴滅活30min，經(jīng)0.221xm微孔濾器過(guò)濾除菌(按1：9的比例將培養(yǎng)液加入原血清中)后，凍存?zhèn)溆谩?/p>
2．4 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的H460細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/mL，以每孔100μL接種于96孔板。置于5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，吸出培養(yǎng)液，分別加入培養(yǎng)液、鹽水、大補(bǔ)陰湯的含藥血清液，每組重復(fù)3個(gè)孔。之后繼續(xù)置于5％C02、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加藥作用12、24、36和48h后，每孔加入10μL MTT(5g/L)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清，每孔加入100μL DMSO溶解，酶標(biāo)儀492nm檢測(cè)，繪制時(shí)效曲線(xiàn)。
抑制率(％)=[A492(陰性對(duì)照)-A492(大補(bǔ)陰湯)]/A492(陰性對(duì)照)×100％
2．5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化每瓶1×106個(gè)細(xì)胞的密度接種于50mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24h后加入大補(bǔ)陰湯含藥血清，分別于作用0、12、24、36和48h后用生物倒置顯微鏡觀察。
3 結(jié)果
3．1 大補(bǔ)陰湯對(duì)H460細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 大補(bǔ)陰湯于不同時(shí)間作用于H460細(xì)胞后，鹽水組細(xì)胞的存活率隨時(shí)間的增加而增加，而大補(bǔ)陰湯組細(xì)胞的存活率隨時(shí)間的增加而減少。可見(jiàn)大補(bǔ)陰湯含藥血清對(duì)H460細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用并呈明顯的時(shí)間依賴(lài)性。
3．2 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察光學(xué)顯微鏡觀察，與正常對(duì)照組細(xì)胞相比，大補(bǔ)陰湯作用于H460細(xì)胞48h后，部分細(xì)胞變圓，體積變小，少量細(xì)胞表面發(fā)芽，細(xì)胞變成不規(guī)則狀，芽脫落后形成凋亡小體，凋亡小體呈圓形或橢圓形，在凋亡小體內(nèi)可見(jiàn)高度濃縮的染色質(zhì)輪廓，作用72h后，可觀察到凋亡的H460細(xì)胞數(shù)量增多，少部分細(xì)胞脫落，漂浮于培養(yǎng)液中，亦有少數(shù)細(xì)胞體積增大，細(xì)胞腫脹、破裂，呈壞死狀。
4 討論
【摘要】 目的 為初步探討中藥青光安含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的作用機(jī)制和為中藥對(duì)青光眼的體外療效研究提供一種新的研究方法。方法：不同濃度青光安顆粒劑和益脈康片劑給3月齡SD大鼠灌胃，獲取不同含藥濃度的大鼠血清；建立視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)的常壓和高壓模型，并用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)凋亡細(xì)胞百分率；利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的檢查。結(jié)果：成功獲取中藥的含藥血清，并將其用于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的體外培養(yǎng)；成功分離并培養(yǎng)了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)模型，RGCs的混合培養(yǎng)最長(zhǎng)可存活3～6周，RGCs的純化培養(yǎng)可存活時(shí)間4～7天；成功對(duì)純化培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行壓力造模。壓力20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg,加壓時(shí)間1～4小時(shí)均能促進(jìn)RGCs的凋亡，其凋亡細(xì)胞的數(shù)目以80mmHg、4小時(shí)為最多（P
關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 壓力 細(xì)胞調(diào)亡 含藥血清
青光眼致盲的最主要原因是視神經(jīng)的損害以及由此引起的視野損害。研究證明[1～4]其損害的主要靶組織細(xì)胞是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，而且青光眼中部分視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是通過(guò)凋亡的方式死亡的。為進(jìn)一步探討青光安顆粒劑對(duì)青光眼患者視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)理，我們將利用體外培養(yǎng)的RGCs進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)臨床治療青光眼的藥物療效及進(jìn)行藥理學(xué)研究，進(jìn)一步從分子生物學(xué)角度研究青光安對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下：
1.青光安含藥血清的制備
1.1 實(shí)驗(yàn)材料 3月齡的SD大鼠，由湖南中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。雌、雄不拘，體重130～150g。
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 青光安顆粒劑（批號(hào)020208）由湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科制備；益脈康片劑（批號(hào) 國(guó)藥準(zhǔn)字 Z20010081）由湖南湘雅制藥有限公司生產(chǎn)
1.4 實(shí)驗(yàn)方法 按隨機(jī)的方法將48只SD大鼠分成六組，標(biāo)志每只大鼠，并稱(chēng)重登記。將以上六組按隨機(jī)的方法分成青光安20倍組、青光安10倍組、青光安5倍組、青光安2.5倍組、益脈康5倍組和模型組。按體表面積換算的方法計(jì)算出每只大鼠的灌藥量。所有組別的大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一天后開(kāi)始按計(jì)算好的劑量灌胃，其中模型組灌同等劑量的生理鹽水。灌藥7天后，開(kāi)始麻醉處死提取血清。
2.試驗(yàn)材料和方法
2.1試驗(yàn)材料 1～3日齡SD大鼠，雌、雄不拘，體重6～8g，母乳喂養(yǎng)。
2.2 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞體外培養(yǎng):參照吳永青等的方法分離培養(yǎng)RGCs[5].
2.3視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的混合培養(yǎng)及純化:
出生1～3天SD乳鼠20只斷頭處死,體視顯微鏡下鈍性分離視網(wǎng)膜,0.125%胰蛋白酶消化20分鐘,用220網(wǎng)無(wú)菌鋼網(wǎng)過(guò)濾,小牛血清終止消化,1000r/min離心5min,去上清液,加20%DMEM培養(yǎng)液,用吸管反復(fù)吹打,制成細(xì)胞懸液。計(jì)數(shù)后加入96孔板和預(yù)先植入2×2cm2蓋玻片的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)和檢測(cè),另一部分進(jìn)行視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的以羊抗鼠的IgG純化。計(jì)數(shù)后進(jìn)行培養(yǎng)和檢測(cè)，并于培養(yǎng)的4h、24h、72h觀察。Nissel小體染色檢查采用緩沖亞甲藍(lán)法[6]，顯微鏡下觀察并照相。
2.4 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞體外高壓培養(yǎng)模型的建立
因設(shè)計(jì)高壓培養(yǎng)模型需要同時(shí)考慮壓力及時(shí)間兩個(gè)因素，而且每次取材數(shù)目有限，故采用裂區(qū)設(shè)計(jì)原理進(jìn)行設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)。
取1～3天齡SD乳鼠36只，按上述方法制備成純化的RGCS，計(jì)數(shù)后按每瓶5×105個(gè)細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶，置于37℃，5％CO2孵化箱培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后用帶T型三通管的橡皮塞將RGCSS密閉于培養(yǎng)瓶中，按照加壓時(shí)間分1h、2h、3h、4h四個(gè)組。用打氣球從T型管注入消毒的空氣，從與培養(yǎng)瓶相通得到壓力表讀取壓力值。壓力分別為對(duì)照0mmHg、20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg等5個(gè)亞組。37℃、5％CO2孵箱培養(yǎng)。
2.5 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax的檢測(cè)
利用流式細(xì)胞儀對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的DNA含量進(jìn)行檢測(cè)，流式細(xì)胞儀檢測(cè):首先隨機(jī)將32瓶細(xì)胞按常壓和高壓分組，高壓組以80mmHg加壓4小時(shí)，然后各自分成青光安2.5、5、10、20倍組，益脈康5倍組，模型組，空白組及流式細(xì)胞儀上機(jī)對(duì)照組，其中caspase-3和caspase-8各8組。前六組加入占總培養(yǎng)液15％的含藥血清，37℃下5％CO2孵化箱中培養(yǎng)48h后，收集細(xì)胞。前七組PBS漂洗兩次后，70％的酒精4℃下固定4h，在流式細(xì)胞儀下檢查。第八組未經(jīng)固定及染色處理，作為上機(jī)時(shí)的陰性對(duì)照。
2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用spss for windows 10.0版醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用方差分析。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1壓力對(duì)純化培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的影響
倒置相差顯微鏡下觀察，壓力低、加壓時(shí)間短的細(xì)胞生長(zhǎng)影響較少，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變；壓力高、加壓時(shí)間長(zhǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)影響較大，細(xì)胞核膜收縮呈舟狀，細(xì)胞變形變小，其生長(zhǎng)影響與加壓的大小和加壓時(shí)間呈正相關(guān)。
3.2壓力對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響
視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡檢測(cè)由南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院流式細(xì)胞中心完成。結(jié)果顯示：細(xì)胞凋亡的百分率隨加壓壓力增大、加壓時(shí)間延長(zhǎng)遞增。在0mmHg組，1、2、3、4h均無(wú)壓力影響，故凋亡百分率結(jié)果差異不大，而20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg組細(xì)胞凋亡百分率隨加壓時(shí)間延長(zhǎng)而增大。而且20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg組的凋亡均高于對(duì)照組0mmHg組。在時(shí)間和壓力兩方面結(jié)果，經(jīng)方差分析均有顯著性差異。
3.3含藥血清對(duì)常壓體外純化培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Bcl-2表達(dá)的影響
青光安20、10、5倍組、益脈康5倍組和青光安2.5倍組Bcl-2均有較強(qiáng)表達(dá)，青光安20倍組>青光安10倍組>青光安5倍組>益脈康5倍組>青光安2.5倍組。Bcl-2為抑制凋亡的蛋白，其高表達(dá)提示對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有保護(hù)作用，其表達(dá)率青光安20倍組、青光安10倍組、青光安5倍組、益脈康5倍組、青光安2.5倍組均優(yōu)于模型組。青光安20倍組和青光安10倍組益脈康5倍組,青光安5倍組和青光安2.5倍組與益脈康5倍組比較無(wú)顯著差異。上機(jī)對(duì)照組為定義Bcl-2表達(dá)陰性的指標(biāo)，其分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.4含藥血清對(duì)常壓體外混合培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Bax表達(dá)的影響：
青光安20倍組、青光安10倍組的Bax表達(dá)明顯低于其它組，且青光安含藥濃度越低，Bax的表達(dá)越強(qiáng)。益脈康5倍組與青光安5倍組的Bax表達(dá)接近；青光安2.5倍、模型組之間的Bax表達(dá)值接近。Bax是Bcl-2家族中促進(jìn)凋亡的一種蛋白，與Bcl-2有拮抗作用，凋亡越明顯，其表達(dá)越強(qiáng)。在青光安含藥血清組，青光安灌胃劑量越大，青光安血清含藥量越高，其Bax的表達(dá)越低。
3.3含藥血清對(duì)高壓純化體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Bcl-2表達(dá)的影響
青光安20倍組、青光安10倍組Bcl-2的表達(dá)明顯高于其它六組(P＜0.01)。
3.4含藥血清對(duì)高壓體外純化培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞Bax表達(dá)的影響
青光安20倍組、青光安10倍組的Bax表達(dá)明顯低于其它組(P＜0.01)，且青光安含藥濃度越低，Bax的表達(dá)越強(qiáng)。
4.討論
青光眼的病理改變主要是RGCs及其軸突的變性、萎縮、喪失，最終導(dǎo)致青光眼視功能的永久性損害[7]。RGCs死亡的主要方式是細(xì)胞凋亡，這已被Quileyh和Valenzuela等[7～9]證實(shí)。青光安顆粒由黃芪、生地、茯苓、車(chē)前子、地龍、赤芍、紅花、白術(shù)等藥物組成，具有益氣活血利水之功,經(jīng)臨床驗(yàn)證，能增強(qiáng)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞抗缺氧、缺血的能力,延長(zhǎng)細(xì)胞的壽命，對(duì)視網(wǎng)膜和視神經(jīng)有保護(hù)作用。Bcl-2是最早發(fā)現(xiàn)的抑制細(xì)胞凋亡的蛋白，由Bcl-2基因編碼，它是定位在線(xiàn)粒體膜、核外膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜的整合蛋白，是一種重要的抑制細(xì)胞凋亡的基因，現(xiàn)已知道Bcl-2基因產(chǎn)物并不改變細(xì)胞增殖的速度，而是通過(guò)抵抗多種形式的細(xì)胞死亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目增加。而B(niǎo)ax是Bcl-2家族中最具有促進(jìn)死亡特征的基因。而B(niǎo)c1-2與Bax基因表達(dá)水平的高低與凋亡調(diào)控直接有關(guān)，細(xì)胞內(nèi)Bax高表達(dá)時(shí)，細(xì)胞對(duì)死亡信號(hào)敏感，加速細(xì)胞凋亡；當(dāng)Bcl-2高表達(dá)時(shí)，Bax-Bax分開(kāi)，Bcl-2可與Bax形成異源性二聚體，中和了Bax-Bax促進(jìn)凋亡作用，抑制細(xì)胞凋亡[10～11]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)血清藥理學(xué)和體外高壓純化培養(yǎng)的方法，研究青光安顆粒劑對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果青光安20倍組和青光安10倍組的含藥血清均能抑制RGCs的Bax蛋白的表達(dá)，可能青光安含藥血清改變了體外培養(yǎng)RGCs的生存環(huán)境，同時(shí)Bcl-2的表達(dá)增多，通過(guò)異源二聚體的形成抑制Bax的轉(zhuǎn)位及Bax二聚體的形成，從而抑制了Bax的表達(dá)。隨著B(niǎo)ax-Bax二聚體的減少，Cyt c和AIF釋放也減少，阻斷了細(xì)胞凋亡的信號(hào)途徑，從而抑制細(xì)胞凋亡。其機(jī)制可能是含藥血清改變了體外培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境，通過(guò)抑制氧自由基的產(chǎn)生或起一種抗氧化劑的作用；或通過(guò)阻斷Ca2＋從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中釋放；或通過(guò)影響線(xiàn)粒體釋放細(xì)胞色素C而產(chǎn)生抗凋亡的作用。而且Bcl-2的高表達(dá)可抑制促進(jìn)細(xì)胞凋亡的Bax蛋白的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)雖然證實(shí)了青光安含藥血清能抑制體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡，對(duì)其有保護(hù)作用，進(jìn)一步驗(yàn)證了青光安顆粒劑對(duì)青光眼患者視神經(jīng)的保護(hù)作用，但其抑制凋亡的機(jī)制尚待深入探討。而且青光安顆粒劑對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞、篩板外基質(zhì)的保護(hù)作用將是我們下一步研究的重點(diǎn)。
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答辯的邀請(qǐng)函范文一
尊敬的老師：
中國(guó)地質(zhì)大學(xué)(武漢)學(xué)生會(huì)茲定于 20xx年4月28日 下午兩點(diǎn)在 教一一階 舉辦學(xué)院五四創(chuàng)優(yōu)答辯評(píng)比活動(dòng)，特邀請(qǐng)您作為此次活動(dòng)的嘉賓評(píng)委，屆時(shí)恭候您蒞臨指導(dǎo)工作，感謝您的參與和支持，祝您工作順利!
此致
敬禮
中國(guó)地質(zhì)大學(xué)(武漢)學(xué)生會(huì)
20xx 年 4 月 24日
答辯的邀請(qǐng)函范文二
xx-xxx教授：
我校xx-xx教授指導(dǎo)的20xx級(jí)xx-xx專(zhuān)業(yè)碩士研究生xx-x同學(xué)位論文答辯會(huì)擬定于xx-xx年xx月xx日上午8:30在大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院外科三樓會(huì)議室舉行。
茲聘請(qǐng)您為答辯委員會(huì)委員，屆時(shí)請(qǐng)您撥冗參加，特此致函!
大連大學(xué)
附屬中山醫(yī)院
20xx年 5月16日
答辯的邀請(qǐng)函范文三
尊敬的 教授(老師)：
您好!
我是經(jīng)濟(jì)與貿(mào)易學(xué)院團(tuán)委學(xué)術(shù)科技部部長(zhǎng)楊露梅。
由華南理工大學(xué)經(jīng)濟(jì)與貿(mào)易學(xué)院主辦的20xx年大學(xué)生科技創(chuàng)業(yè)挑戰(zhàn)大賽即將拉開(kāi)帷幕。本次大賽秉承為同學(xué)們提供一個(gè)展示自己的舞臺(tái)的宗旨，針對(duì)華工全校學(xué)生，由參賽者(隊(duì))以技術(shù)或創(chuàng)意來(lái)尋找創(chuàng)業(yè)點(diǎn)，進(jìn)而圍繞創(chuàng)業(yè)點(diǎn)的可行性，撰寫(xiě)創(chuàng)業(yè)計(jì)劃書(shū)。通過(guò)比賽促進(jìn)同學(xué)們將理論與實(shí)際相結(jié)合，進(jìn)而提高同學(xué)們的綜合能力。
我們了解到老師您專(zhuān)業(yè)知識(shí)豐富且非常受學(xué)生尊敬和愛(ài)戴，并且您對(duì)我們大學(xué)生的就業(yè)與創(chuàng)業(yè)問(wèn)題十分關(guān)心。所以我們?cè)诖苏\(chéng)摯邀請(qǐng)您擔(dān)任我們本次科創(chuàng)大賽的評(píng)委，對(duì)參賽作品進(jìn)行打分點(diǎn)評(píng)。我們相信，有老師您擔(dān)任我們的評(píng)委，將會(huì)讓我們的比賽更有質(zhì)量，更具權(quán)威性。
為了不耽誤老師您太多的時(shí)間，本次大賽評(píng)委只需依據(jù)評(píng)分細(xì)則對(duì)作品進(jìn)行評(píng)分及點(diǎn)評(píng)即可。屆時(shí)，我們將會(huì)以電子文檔的形式將相關(guān)資料發(fā)至您的郵箱，評(píng)審時(shí)間為5月13日至5月20日。希望老師能在百忙之中抽出一點(diǎn)時(shí)間來(lái)?yè)?dān)任我們大賽的評(píng)委，我們期待您的參與。
最后再次感謝老師您對(duì)我們工作的支持!祝老師工作順利!闔家幸福! 謹(jǐn)致
安祺!
經(jīng)濟(jì)與貿(mào)易學(xué)院團(tuán)委
意大利探親的邀請(qǐng)函范文一敬啟者：
我寫(xiě)此信的目的是邀請(qǐng)我朋友XXX到意大利旅游，從XX年XX月起為期X個(gè)月。
我自XXX年X月進(jìn)去XXXX大學(xué)攻讀XX學(xué)位，我的朋友還未能有機(jī)會(huì)探望我，因此我希望能有機(jī)會(huì)和她同游澳洲。
我保證在旅游期間，我的朋友將會(huì)遵守澳大利亞的法律和規(guī)章制度，并在指定日期內(nèi)返回中國(guó)繼續(xù)工作。
希望您能在他申請(qǐng)簽證的過(guò)程中給予協(xié)助。如果您有任何問(wèn)題，請(qǐng)通過(guò)以下方式與我聯(lián)系：
XXX地址
XXX電話(huà)
XXXEMAIL
邀請(qǐng)人：XXX
XXXX年XX月XX日
意大利探親的邀請(qǐng)函范文二我(xxx)，身份證號(hào)：xxx，邀請(qǐng)居住在意大利，護(hù)照號(hào)：xxx,出生年月：xxxx，于20xx年4月份來(lái)杭州為期1個(gè)月探親。
我將負(fù)擔(dān)XX在杭州期間的一切開(kāi)銷(xiāo)。我的住址：XXX，工作單位：XXX，手機(jī)號(hào)碼：XXX，辦公電話(huà)：XXX，家庭電話(huà)：XXX。
邀請(qǐng)人：XXX
XXXX年XX月XX日
意大利探親的邀請(qǐng)函范文三致中華人民共和國(guó)駐意大利大使館/總領(lǐng)事館
尊敬的總領(lǐng)事先生及有關(guān)簽證官員：本人xxx，為中華人民共和國(guó)公民，現(xiàn)居xxx。本人現(xiàn)致函邀請(qǐng)xxx 于xxxxx來(lái)華探親?，F(xiàn)將有關(guān)信息告知如下： 被邀請(qǐng)人個(gè)人信息：
姓名：xxxx(同護(hù)照姓名), 性別：xx，出生日期：xxxx年xx月xx日 護(hù)照號(hào)碼：xxxxxxxxx
被邀請(qǐng)人訪(fǎng)問(wèn)信息：
來(lái)華目的：xxxx。
預(yù)計(jì)抵達(dá)日期：xxxx抵達(dá)(xx)，
預(yù)計(jì)離境日期：xxxx離開(kāi)(xx)。
訪(fǎng)問(wèn)地點(diǎn)：(xx)
與邀請(qǐng)人關(guān)系：xx 為邀請(qǐng)人的xxxx
費(fèi)用來(lái)源：往返機(jī)票由被邀請(qǐng)人自理。被邀請(qǐng)人在華期間的食宿由本人提供。
邀請(qǐng)人個(gè)人信息：
姓名： Xxx寫(xiě)作模板
住址：xxxxxxxx
電話(huà)：xxxx
身份證：見(jiàn)身份證復(fù)印件。
多謝您的大力協(xié)助!
此致敬禮!
